Diabetologia：激活但功能受损的记忆Tregs在1型糖尿病患者进展缓慢的过程当中逐渐扩展

从第一次再次出现去甲自身去甲素到再次出现1型式哮喘流行病学症状的困难重重率在成人中后期就有不错的刻画，多个去甲自身去甲素无症状的成人中的有70%在去甲素转换后10天内身患哮喘，而随访15年的成人这一比例增加到84%。远比之下，占流行病学1型式哮喘一半以上的型式1型式哮喘的发病机制还没有给予应有的研究工作。

越来越多的人开始用作仍须系统来表述1型式哮喘的困难重重：生物基底在再次出现多种去甲自身去甲素时转入第1先决条件，再次出现高血压异常时转入第2先决条件，再次出现症状时转入第3先决条件。一些多发去甲自身去甲素无症状的生物基底，在1期和2期，困难重重较慢速，并发展为发病的1型式哮喘。我们在此之前刻画了一四组在首次扫描到多种去甲自身去甲素样品后数10年无哮喘的以致于慢速困难重重者，这四组病患人数少，但基本特征比较明确。随后，我们发现去甲自身特异性特异性CD8+T肝细胞自由基在困难重重快速的病患中的基本不普遍存在，但在近期发病和或多或少的哮喘病患中的很容易扫描到。这有可能表明，与困难重重病患远比，这些病患自身免疫自由基的调节增强。

早期研究工作表明，尽管调节性T肝细胞(Treg)数量短时间，但哮喘病患普遍存在一些特性不足之处，其中的仅限于对IL-2的自由基灵活性增高。此外，哮喘病患中的的波动CD4+T肝细胞有可能对调节兼具抵抗性，展现出为波动T肝细胞的可抑制移向，自然环境归因于的Treg和基底外归因于的作用于Treg，以及特异性经历的CD4+T肝细胞中的IL-2自由基移向。本研究工作的旨在是刻画了CD4+调节性T肝细胞(Treg)在一个大以致于快速困难重重者中的的基本特征，他们的平均平均年龄为43岁(31-72岁)，随访时间为18-32年。

原理：BOX研究工作是一项以人群系统化的纵向研究工作，在21岁以下出院的病患亲属中的检查1型式哮喘的小心心理因素。我们在此之前刻画了长期快速困难重重者的基本特征，他们持续保持多重去甲自身去甲素无症状至少10年，但没有再次出现哮喘的流行病学症状，慢速性或非进行时性自身免疫。随后，10名继续持续保持无哮喘并愿意给予大量血液样品的快速困难重重者延展到T和B肝细胞特性分析。在以外的研究工作中的，8名慢速困难重重者(SP四组)，中的位平均年龄43岁(31-72岁)，18 - 32岁相互间的去甲自身去甲素无症状。所有的自发性都处于1型式哮喘困难重重的1期，尽管一些人随后失去了去甲自身去甲素对某些特异性的深红色，然而，一名病患已经处于2期数6年，但没有再次出现流行病学症状，一名病患被诊断为哮喘，该受试者72岁，在采集实验室样品时，其HbA1c升高到53 mmol/mol(7%)，在统计分析中的对该NADPH进行时了单独评核。转化外周血单个核肝细胞(PBMCs)，改用多实例流式肝细胞拳法和T肝细胞可抑制试验车评核NADPH中的Treg的高频率、变异式和特性。用作FlowSOM和CITRUS(聚类验、表征和回归)进行时无委派聚类分析，评核Treg变异式。

结果：与健康NADPH远比，来自慢速困难重重基底的清醒CD4+T肝细胞的委派聚类看出，抑制的清醒CD4+ Treg高频率增加，与糖皮质激素作用于的TNFR相关蛋白(GITR)对此增加有关。一名HbA1c升高的病患与困难重重快速者和匹配的对照四组远比，Treg谱有所多种不同。特性分析表明，与健康NADPH远比，来自快速困难重重基底的Treg介导的CD4+波动T肝细胞可抑制明显受损。展现出为对波动CD4+T肝细胞CD25和CD134对此的可抑制增加。

绘出1 全面性的变异式分析看出，CD4+Treg非典型式在慢速困难重重函数调用中的增加。由FlowSOM填充的Treg室，有数在来自所有NADPH的活CD4+CD45RA -肝细胞上。根据记号物对此验出10个元簇:清醒T肝细胞_1;清醒T cell_2;清醒T cell_3;清醒T cell_4;CD49b清醒T肝细胞;HLA-DR + GITR +清醒T肝细胞;闪存Treg_1;闪存Treg_2;闪存Treg_3;和闪存Treg_4。(a)用作9个多种不同Treg记号填充的10个元簇的MST。每个路由表值得一提的是一个一个大(100个一个大)，巨大的元一个大(10个元一个大)在路由表四组区域内手绘。每个路由表中的的碗绘出对此单个记号的对此级别。(b)每个元聚类的热绘出，以看出整基底记号对此。(c, d)为HD四组(c)和SP四组(d)填充绘出，以及FlowSOM比对的每个元簇的覆盖层。(e-l)相对轻元素为每个metacluster盒终点站绘出(轻元素> 0.05%)确定为HD和SP四组:闪存Treg_2 (e),闪存Treg_3 (f),闪存Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +清醒T肝细胞(h)、清醒T cell_1(i),清醒T cell_2 (j),清醒T cell_3 (k) n d CD49b清醒T肝细胞(l)。红色带子值得一提的是慈善机构SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon匹配符号秩验。此键适用于绘出形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

绘出2 用作CITRUS的预测模型式证明，Treg高频率的增加是困难重重快速的标识。分级离子通道(a - f)和棉花分析(g-k)比较SP自发性和匹配的HD自发性在CD4+CD45RA−T肝细胞上的歧异。(a)杂交CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l社会性的标识性绘出。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3钼，然后通过HLA-DR和GITR对此进行时转化，仿真FlowSOM社会性。(b) HD(横纹)和SP(黑纹)四组以及NADPHSP 606(红色)中的CD25+ cd127的高频率摘要绘出。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+离子通道子集的盒终点站绘出;(c) HLA-DRloGITR−(闪存Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(闪存Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(闪存Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+闪存T cell)。(g - i)甜菜簇螺旋由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3对此强度图例，箭头明显的簇被比对为SP和HD函数调用相互间的多种不同。(j)盒终点站绘出看出了在SP(黑纹)和HD(灰点)四组中的，CITRUS清醒Treg_3和Treg_4的相对轻元素(比例)。(k)直方绘出看出每个簇的变异式(粉红色)和Treg记号相对对此与背景对此(蓝色);上列，闪存Treg_3;下面正要，闪存Treg_4。背景与所有其他簇中的记号的对此有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon匹配符号秩验

绘出3 与健康献血者远比，困难重重快速者清醒treg的GITR增加。每个清醒CD4+T肝细胞元簇(清醒T肝细胞_1;清醒T cell_2;清醒T cell_3;CD49b +清醒T肝细胞;HLA-DR + GITR +清醒T肝细胞;闪存Treg_2;闪存Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)扫描每个对此记号的变化。(a,b)来自HD (a)和S (b)函数调用的对此热绘出(sp606不仅限于在内)。(c,d)清醒Treg_4元簇中的所有HD(灰色)、所有SP(蓝色)和SP 606(红色)的FlowSOM GITR对此串联，看出直方绘出(c)和摘要绘出(d)。Wilcoxon匹配符号秩和验，p< 0.07(红色)所有NADPH仅限于，p< 0.05(蓝色)NADPHSP 606和匹配的HD不仅限于在测试中的。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs中的GITR对此，从分级离子通道，从所有HD(灰色)、所有SP(蓝色)和SP 606(红色)串联，看出直方绘出(e)和摘要绘出(f) *p< 0.05, Wilcoxon匹配符号秩验

绘出4 来自快速困难重重的CD4+ treg肝细胞遏制波动CD4+T肝细胞的灵活性增高。SP四组用蓝色的终点站和带子对此，HD四组用黑色的终点站和带子对此，红色的终点站/带子对此NADPHsp606。用作CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T肝细胞进行时分选。CD4+CD25−(；也者)被记号为CFSE, Treg按观察的比例滴定。用抗CD3 /28微珠激活肝细胞，养成3翌日进行时流式肝细胞拳法扫描。(a-d)与CD4+；也者相对应的treg养成(自基底)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD；也者养成。(a,b,f) CFSE细胞分裂(a,e)和CFSE可抑制平均值(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的可抑制平均值。用作无症状对照(抑制的组织起来肝细胞不含treg)计算可抑制平均值。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差分析。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

绘出5 波动CD4+T肝细胞对快速困难重重的T肝细胞激活的可抑制更尖锐。SP四组用蓝色的终点站和带子对此，HD四组用黑色的终点站和带子对此，红色的终点站/带子对此NADPHsp606。用作CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T肝细胞进行时分选。CD4+CD25−(；也者)被cfsel记号，treg按观察的比例滴定。用抗CD3 /28微珠激活肝细胞，养成3翌日进行时流式肝细胞拳法(CD25反染)和肝细胞因子分析。HD Treg与HD、SP或sp606；也者共同养成。(a,b) CFSE细胞分裂(a)和CFSE可抑制三份(b)。(c,d) CD25可抑制三份(c)和CD134可抑制三份(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在共养成中的的对此。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差分析。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

得出结论：我们断定的得出结论是，来自快速困难重重子的激活清醒CD4+Treg在GITR对此中的给予了延展和丰富，重申了进一步研究工作Treg在1型式哮喘风险生物基底中的的系统性的必要。

出处出处：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28